| 卵黃抗體(IgY)指從免疫禽蛋中提取出的針對特定抗原的抗體。自1893年Klemperer首次報道雞蛋中存在抗體以來，卵黃抗體的研究不斷深入，目前在卵黃抗體的形成、生物學特性等方面已研究得比較清楚，并且卵黃抗體作為診斷試劑和防治藥物的研究愈來愈受到關注。本文就免疫雞卵黃抗體的研究進展作一綜述。 1、卵黃抗體的形成 禽類的免疫系統包括細胞免疫和體液免疫，分別受胸腺和法氏囊的控制。當機體受到外來抗原刺激后，法氏囊內的B細胞分化成為漿細胞，分泌特異性抗體進入血液循環，當血液流經卵巢時，特異性抗體(主要是IgG)在卵細胞中逐漸蓄積，形成卵黃抗體；當卵細胞分泌進入輸卵管時，流經輸卵管的血液中含有的特異性抗體(主要是IgA和IgM)進入卵清中，形成卵清抗體。IgG移行進入卵細胞是受體作用的結果，因而IgG可在卵細胞中大量蓄積，濃度高于血液中的IgG。與卵黃抗體相比，卵細胞在輸卵管中移行的時間較短，因而卵清抗體含量極微。卵黃抗體在禽胚孵化過程中逐漸進入禽胚血液，為剛出殼雛雞提供被動免疫保護，在雛雞疾病預防中具有重要作用，但同時也會干擾雞疫苗的免疫效果。 2、IgY的性質 IgY的性質與哺乳動物的IgG相似。正常雞IgY的分子量約為180KDa，由兩條輕鏈(2L)和兩條重鏈(2H)組成，分子量分別為60-70KDa和22-30KDa。其等電點約為5.2。 IgY與一般哺乳動物IgG相比，IgY具有較強的耐熱、耐酸、抗離子強度和一定的抗酶降解能力。 在低于75℃條件下，IgY具有良好的熱穩定性。IgY制劑在4℃貯存5年或在室溫貯存6個月其活性仍無明顯變化或下降，65℃時可保持24h以上，70℃時加熱90min后其活性才明顯下降60℃，30min條件下巴氏消毒不影響IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。 IgY在pH4.0-11.0時比較穩定，pH3.0-3.5時活性迅速下降，pH12時活性亦有所下降。 IgY對胃蛋白酶有較高的抵抗力，但對胰蛋白酶十分敏感。將胃蛋白酶和IgY在pH2.0溫育1h后，幾乎所有活性喪失，但在pH4.0時1h后可保持91%的活性，甚至溫育10h后仍有63%活性。IgY分別與胰蛋白酶和胰凝乳酶溫育8h，活性分別保持39%和41%。 3、IgY的作用機理 特定病原菌的卵黃抗體能直接黏附于病原菌的細胞壁上，改變病原細胞的完整性，直接抑制病原菌的生長；卵黃抗體可黏附于細菌的菌毛上，使之不能黏附于腸道黏膜上皮細胞；一部分卵黃抗體在腸道消化酶作用下，降解為可結合片段，這些片段含有抗體的可變小肽(Fab)部分，這些小肽很容易被腸道吸收，進入血液后能與特定的病原菌黏附因子結合，使病原菌不能黏附易感細胞而失去致病性，而IgY的穩定區(Fe部分)留在腸內。 4、IgY分離、提純方法 卵黃中的主要成分是蛋白質和脂肪，其比例為1：2。大部分蛋白質都是脂蛋白，存在于卵黃顆粒中，不溶于水，只有卵黃球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黃球蛋白。因此IgY的分離純化首先需要有效地去除卵黃中的脂類，從水溶性蛋白中分離IgY。 多年來，已建立了許多較為高效而經濟的方法，這些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然膠，如藻酸鈉、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步純化蛋白質。 1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)兩步沉淀法，分別用終濃度為3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸銨鹽析法去除PEG。1985年，在此基礎上提出了冷乙醇沉淀的改進方法，使產量提高，而且能有效地去除殘留PEG。1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的產量相當，但提取的IgY制品含有一定量的雜蛋白。Bade和Stegemann(1984)用預冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白質并去除脂質，經DEAE柱層析進一步純化，其IgY抗體活性與用Polson法提純的IgY之間無明顯差別，且穩定性好，經3次以上凍融，抗體活性未見改變。1992年Akita等用水稀釋法(WD)提純IgY，每個卵黃可獲得100mg以上的IgY。此后，Akita等比較了WD法、PEG法、DS法和黃原膠法(Xanthan法)的提純效果，結果表明：WD法產量最高，其次為DS法，WD法更適合大規模生產。 1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分級離心的方法，分別用60%、30%、25%的冷乙醇沉淀離心，得到純度達99%以上的IgY。此法適用于大規模制備IgY。 工業上大規模生產IgY的方法有：超臨界二氧化碳氣體抽提法、卡拉膠法、硫酸銨鹽析法。 5、IgY在動物疾病防治方面的應用 5.1 IgY在動物疾病預防方面的應用 研究表明，IgY能抵抗幼齡動物腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。故常在幼畜飼料或添加劑中加入一定量的針對某些特定疾病的IgY，以使其獲得有效的被動免疫。何月英等利用小鵝瘟強毒制備的卵黃抗體，對2-3日齡雛鵝進行預防，其保護率高達100%。楊曉梅等用鴨病毒性肝炎I型雞胚毒免疫雞，制備的雞抗鴨病毒性肝炎高免卵黃抗體，經實際應用于預防時，雛鴨的平均成活率為96.9%。 5.2 IgY在動物疾病治療方面的應用 目前，卵黃抗體己被廣泛應用于許多疾病的防治。汪銘書應用抗鴨病毒性肝炎(DHV)的卵黃抗體治療人工感染的鴨時，當用1萬倍LD50強毒時保護率可達到100%。張英等用抗小鵝瘟的卵黃抗體治療發病鵝群，治愈率為95.2%。此外，應用多種病原菌免疫制備的卵黃抗體還可以防治多種病原菌的感染。詹麗娥等用IBD、ND和EDS-76三聯高免卵黃抗體治療上述三種疾病，總有效率可達50%以上。日本成功地從雞蛋中提取出能夠殺死幽門螺旋桿菌的抗體，并以這種抗體為原料制成了能殺死人體內幽門螺旋桿菌的酸奶。 用卵黃抗體治療疾病，安全、高效且無公害，我國已有商品化的卵黃抗體供應。 5.3 1gY在動物疾病診斷方面的應用 卵黃抗體和哺乳動物免疫球蛋白有許多不同之處，如它不與金色葡萄球菌A蛋白結合，不與哺乳動物Fc受體結合，對哺乳動物補體無固定作用等，這使得卵黃抗體在檢測診斷上具有更強的特異性和靈敏度，所以卵黃抗體可以應用于免疫熒光試驗、ELISA試驗、免疫擴散、免疫電泳等。鄭厚旌等用卵黃瓊擴實驗檢驗卵黃中的IBD抗體水平，結果表明用卵黃瓊擴試驗替代血清瓊擴試驗檢測IBD抗體水平是可行的，并且具有經濟、省力、省時的特點。此外卵黃抗體有望取代傳統的多克隆抗體的生產，獲取大量更有效的抗體，同時也可減少對動物的副反應，提高動物的福利。 6、IgY開發前景 IgY作為替代抗生素的新型飼料添加劑正在引起人們的關注，IgY取代抗生素用作生長促進劑，不會產生藥物殘留，是一種安全的綠色添加劑。 生產技術較為成熟：用雞卵黃大量生產、制備多克隆抗體是近年來抗體制備技術中新興的研究領域。 IgY產量高，價格低廉。 使用IgY技術生產免疫球蛋白，可以減少對動物的應激，提高動物的福利。 年齡較大的動物會導致IgY分解失活，然而通過包埋處理可避免這一問題。Shimizu等(1993)用脂質體包埋IgY，在pH2.8的胃蛋白酶中37℃溫育1h，包埋的IgY仍可保存80%的活性。 綜上所述，雞卵黃免疫球蛋白是一種高產、優質的多克隆抗體，而且雞大規模工業化飼養成本低，經濟方便，同時制備IgY的工藝相對簡單。因此，IgY在生物制品的開發和疾病的防治方面具有廣闊的前景。應用卵黃抗體防治疾病也有不可避免的缺點，如可能帶有蛋傳染性疾病的病原，對養禽業存在潛在的威脅。 |
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