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畜牧人

標題: 口蹄疫用注射血清治療的效果如何？血清如何制備？期待高手 [打印本頁]

作者: yuekui001 時間: 2010-2-2 12:13
標題: 口蹄疫用注射血清治療的效果如何？血清如何制備？期待高手
口蹄疫用注射血清治療的效果如何？血清如何制備？期待高手

作者: xrkaz_001 時間: 2010-2-2 12:23
在豬場發(fā)生口蹄疫的情況下，我們首現(xiàn)想到注射疫苗但為時已晚，因為產(chǎn)生抗體就需要10~15天，所以我們?yōu)榱送炀葥p失，特別是仔豬就選擇“血清”因為產(chǎn)生抗體時間短一般12個小時就有效了，但我們使用“血清”注射時一定要保證豬只健康特別是仔豬在一切健康情況下，特別是體溫正常才能注射，今天我就因為沒有注意量體溫給仔豬注射，倒至70頭豬仔5頭因體溫高注射產(chǎn)生急性心肌炎、而急性死亡。

作者: 星座 時間: 2010-2-2 12:49
學(xué)習(xí)了謝謝

作者: liukai721026 時間: 2010-2-2 14:25
使用疫苗免疫育肥豬，經(jīng)過一免、二免、三免.....，多次免疫之后，抗體效價足夠高之后，即可采血分離血清。

作者: benniusiliao 時間: 2010-2-2 17:17
方法簡單，但要能請適合種型號?。?hr noshade size="2" width="100%" color="#808080"> 作者: 鹽太咸 時間: 2010-2-2 22:01
靠
這個很容易
前提是你的場每次發(fā)生的都是同一種類型的口蹄疫

作者: xrkaz_001 時間: 2010-2-3 06:00
在網(wǎng)上找了篇詳細的文章供你參考吧，方法是一樣的

2007-03-04 18:37 免疫血清的制備

免疫血清的制備是一項常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)。高效價、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑(如用于制備免疫標記抗體等)，也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應(yīng)答性的機體，常可獲得高效價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等，也是影響免疫血清效價的重要因素應(yīng)予重視。

　　　　原理
　　　　免疫方法
　　　　放血
　　　　分離血清
　　　　結(jié)果鑒定
　　　　材料
　　　　注意事項

--------------------------------------------------------------------------------

　　一、原理

　　具有免疫原性的抗原可刺激機體相應(yīng)B細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細胞克隆所識別，因此由某一抗原刺激機體后產(chǎn)生的抗體，實際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物(即多克隆抗體)。另外，抗體的產(chǎn)生具有回憶應(yīng)答的規(guī)律性，牨m現(xiàn)為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應(yīng)答特點截然不同。這是由于記憶性B細胞參與再次應(yīng)答所致。

　　二、免疫方法

　　根據(jù)抗原的性質(zhì)不同而異。下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說明。

　　1.　用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮膚；

　　2.　第一次免疫: 用2ml注射器吸取弗氏完全佐劑(FCA)乳化的抗原(人IgG)下稱FCA-IgG)液1ml，每側(cè)腳掌皮下各注入0.5ml。

　　3.　第二次免疫：間隔10-14天后，于兩側(cè) 窩及鼠蹊部腫大的淋巴結(jié)內(nèi)注入FCA-IgG，每個淋巴結(jié)注0.1ml，其余注入淋巴結(jié)附近皮下共1ml。如淋巴結(jié)未腫大或腫大不明顯時，直接注入兩側(cè)　窩及鼠蹊部皮下。

　　4.　間隔7-10天后，從耳靜脈采血0.5～1.0ml，分離血清，以雙相瓊脂擴散試驗測定免疫血清的抗體效價(即試血)。效價至少應(yīng)達到1∶16以上時才能放血。

　　5.　若效價未達到要求，可用不加佐劑的抗原液(人IgG)耳靜脈內(nèi)注射免疫。即于1周內(nèi)注射3次，分別為0.1、0.3、0.5ml。間隔1周再試血。如效價達到要求應(yīng)立即放血。另外,也可在第2次免疫后，以弗氏不完全佐劑(FIA)乳化的抗原(人IgG)(簡稱FIA-IgG)再免疫1-2次。注射部位、劑量和間隔均同第2次，再試血測抗體效價，如效價達到要求立即放血。

　　三、放血

　　(一)　心臟采用血法

　　1.　家兔仰面，四肢縛于動物固定架上(或由助手抓住四肢固定)；

　　2.　剪去左胸部兔毛，消毒皮膚；

　　3.　用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側(cè)位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動最強的部位；

　　4.　用50ml注射器(連接16號針頭)，傾針45°角度，對準心搏最強處刺入心臟抽血致死；

　　5.　將抽取的血液立即注入無菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清。

　　(二)　頸動脈放血法

　　1.　家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚；

　　2.　沿頸部中線切開皮膚約10cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突??；

　　3.　分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動脈后使之游離；

　　4.　于動脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠心及近心端。結(jié)扎遠心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾??；

　　5.　用尖頭小剪刀在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口，插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫；

　　6.　松開血管夾，使血液流入滅菌三角燒瓶中。一般一只家兔可放血80～100ml。

　　四、分離血清

　　將三角燒瓶的血置37℃溫箱1小時，再置4℃冰箱內(nèi)3～4小時。待血液凝固血塊收縮后，用毛細滴管吸取血清。于3000rpm離心15分鐘，取上清加入防腐劑(0.01％硫柳汞或0.02％疊氮鈉，最終濃度)，分裝后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?br />
　　五、結(jié)果鑒定

　　以雙相瓊脂擴散試驗測定所獲免疫血清的抗體效價，并用瓊指免疫電泳鑒定免疫血清中抗體的質(zhì)量，應(yīng)產(chǎn)生單一的沉淀弧線。鑒定方法的具體步驟參見有關(guān)部分。

　　六、材料

　　(一)　動物：健康成年家兔，雄性，體重2～3公斤。

　　(二)　器材：剪刀、鑷子、注射器(2ml、50ml)附針頭(9號、6號)、稱量瓶(10ml)、量筒、動物固定架、滅菌三角燒瓶(200ml)、手術(shù)器械一套、血管夾、黑絲線、塑料放血管等。

　　(三)　試劑

　　1.　滅菌生理鹽水；

　　2.　純化人IgG(10mg／ml)；

　　3.　消毒酒精及碘酒；

　　4.　羊毛脂；

　　5.　石蠟油；

　　6.　活卡價苗(BCG)(75mg／ml)；

　　7.　弗氏不完全佐劑(FIA)制備：稱羊毛脂10克，逐滴加入優(yōu)質(zhì)石蠟油40ml，邊滴邊研磨，分裝于疫苗瓶中(每瓶10ml)，高壓滅菌(8磅20分鐘)后保存?zhèn)溆谩?br />
　　8.　弗氏完全佐劑乳化抗原(FCA-IgG)的制備：將FIA予溫(60℃30分鐘)，吸取3ml于研缽中，逐滴加入活BCG(75mg／ml)0.5ml及純化人IgG2.5ml(2.4mg／ml)牨_滴入邊研磨直至形成均一性的乳狀液，取1滴滴于冷水面上不散開為合格。

　　七、注意事項

　　1.　免疫用實驗動物的抗體反應(yīng)性個體差異性較大，因此免疫時至少應(yīng)選用兩只以上動物。另外，不能使用妊娠動物。

　　2.　免疫用的抗原必須經(jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注射，否則將明顯影響抗原的免疫效果。上述制備乳化抗原的方法較費時、費力。采用H-81微型振蕩混合器法或三腔管研磨法制備。前者是將抗原液與佐劑按比例混合后，置于混合器上使之劇烈振蕩(頻率2900轉(zhuǎn)／分，振幅6mm)；后者是將免疫用的佐劑和抗原液按比例混合后，吸入注射器內(nèi)再將注射器連接于三腔管上反復(fù)抽吸研磨。這兩種方法約1小時即可使抗原充分乳化。

　　3.　佐劑一方面可提高特異性免疫反應(yīng)的效果獲得高效價的免疫血清，但若抗原不純時，可使抗原中極微量的污染物(0.005mgN)產(chǎn)生抗體，以致導(dǎo)致免疫血清的純度受到影響。另外，有些實驗動物種系對BCG過敏，尤其是豚鼠其次是家兔，當再次注射完全佐劑時,可以引起變態(tài)反應(yīng)而導(dǎo)致免疫失敗。為此，第二次免疫注射時應(yīng)減少佐劑中BCG的含量或改用不完全佐劑，以減少和防止變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生。

　　4.　抗原的劑量決定于抗原的種類。對免疫原性強的抗原劑量應(yīng)相別較少，免疫原性弱的抗原劑量可相對較多。抗原的用量一般以體重計算。在使用佐劑的情況下，一次注入的總劑量以0.5mg／kg體重為宜。如不加佐劑時劑量可加大10倍。另外，免疫周期長者可少量多次注射，免疫周期短者可較大量少次注射。

　　5.　免疫方法上也可采用多點注射法免疫動物。即于家兔脊柱兩旁選4-6點皮下注射，同時于兩側(cè)肩部(或臂部)和鼠蹊部各注一處。每點注0.2ml，間隔2周后再于上述部位選不同點同上注射，也可產(chǎn)生高效價的免疫血清。

自:http://www.37c.com.cn/topic/006/technich/exp1.

作者: poco1111 時間: 2010-3-14 21:23
好麻煩，還治什么啊，殺啊

歡迎光臨畜牧人 (http://www.ylikhb.com/)

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