畜牧人
標題: 胃蛋白酶消化率檢測 [打印本頁]
作者: 于炳欣 時間: 2014-6-19 10:00
標題: 胃蛋白酶消化率檢測
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一、原理
脫過脂的試樣，用溫熱的胃蛋白酶溶液，在恒溫、持續不斷地攪拌下消化16h，過濾分離不溶性殘渣，洗滌、干燥，測定殘渣的粗蛋白含量。同時，測定空白和脫脂未酶解試樣的粗蛋白含量。
二、試劑
本標準所用試劑，除特殊說明外，均為分析純
實驗室用水應符合GB/T 6682中三級水的規格
2.1 0.2%胃蛋白酶溶液:將6.1 mL濃鹽酸稀釋至1 000 mL水中(溶液pHl-2)，加熱至42-45℃ ,加入2g活性為1:10000生化級胃蛋白酶〔若活性不是1：10000，可使用活性1:3000生化級胃蛋白酶 (不可使用非生化級胃蛋白酶)，應注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶濃度應為每毫升20IU〕，并緩慢攪拌直至溶解 勿在加熱板上加熱胃蛋白酶溶液或配制時過熱。臨用前配制。
2.2 乙醚
2.3 丙酮
2.4 定氮試劑:按GB/T 6432中試劑及配制方法規定。5 儀器、設備
三、儀器設備
3.1 恒溫式平轉搖床:溫控范圍20-50℃，水浴式或空氣浴式均可，轉速可調(15-300 r/min).
3.2 實驗室用樣品粉碎機
3.3 索氏抽提器、脫脂設備:按GB/T 6433中儀器、設備規定。
3.4 定氮儀器、設備:按GB/T 6432中儀器、設備規定。
四、測定步驟
4.1 脫脂
稱取1-2g試樣用乙醚脫脂(含脂肪小于1%可不脫脂，含脂肪1%---10%建議脫脂，含脂肪大于10%則必須脫脂)。脫脂方法可參照GB/T 6433中粗脂肪抽提方法進行。脫脂后的樣品需烘干。
4.2 胃蛋白酶消化
稱取脫脂烘干后的樣品若干克(精確至0.0002g)于250 ml帶蓋磨口瓶中，加150ml新配制的并已預熱至42-45℃的胃蛋白酶溶液，要確保樣品完全被胃蛋自酶溶液浸濕，蓋緊瓶蓋，將瓶夾于恒溫搖床上，于45℃恒定攪動16h進行保溫消化。
4.3 消化殘渣的處理
從攪動器上取下磨口瓶，呈45。角放置，讓殘渣沉淀15min以上，隨后在鋪有快速濾紙的布氏漏斗上抽濾，先用少量水將瓶蓋上的殘渣洗至濾紙上，再將磨口瓶保持沉淀時的角度移至布氏漏斗上，慢慢傾出內容物，使之通過濾紙后形成連續的細流，避免任何不必要的攪動。液體通過濾紙的速度應與傾入的速度相同。當上層液體通過濾紙后，于瓶中加人15 mL丙酮，用拇指蓋住瓶口劇烈振搖，放開。再用拇指堵住瓶口，在濾紙上方將瓶倒置振搖，放開拇指讓丙酮和殘渣流到濾紙上。再用一份15ml的丙酮進行洗滌，照上法振搖和倒出。檢查瓶子，并用丙酮再次洗滌。當全部液體通過濾器后，用洗瓶以少量丙酮洗滌漏斗壁上殘渣兩次，并抽干。從布氏漏斗上小心取下載有殘渣的濾紙，無損地移人凱氏燒瓶中，并將凱氏燒瓶置于105 ℃烘箱內烘干。
4.4 粗蛋白的測定
將上述烘干的殘渣按GB/T 6432中方法測定粗蛋白含量(W2)。同時，稱取脫脂烘干后的樣品若干克(精確至0.0002g)，直接按GB/T 6432方法測定脫脂未酶解的樣品中粗蛋自的含量(W1)。
五、結果計算
X(%)=(W1- W2)*100/ W1
式中:X-一試樣的胃蛋白酶消化率，%
W1--脫脂未酶解的原樣品中粗蛋白的平均含量，%
W2--脫脂酶解后殘渣中粗蛋白的平均含量，%
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