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GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定

　　氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

　　GC-MS法優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)合起來，能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。Fente C. A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；PteerBatioens應(yīng)用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織中的CLB含量進(jìn)行檢測，最低檢測限為2ng/g；劉琪等用GC-MS法（EI離子源）檢測豬尿中的CLB，檢測限為0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB，衍生物用電脈沖方式或化學(xué)離子化方式掃描，會產(chǎn)生更高的靈敏度。另外，GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法（NY/T468~2001）。

　　高效液相色譜法（HPLC）

　　HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且，HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實(shí)現(xiàn)分析過程的自動化。黃士新等(1995)應(yīng)用紫外檢測器，在λ=243nm，色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留，最低檢測限可達(dá)2ng/g[4]。國外有人應(yīng)用HPLC (二極管陣列檢測器)測定動物性食品中CLB殘留，測得最低檢測限為1.26ng/g，回收率達(dá)98.9%[5]。目前，我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點(diǎn)是樣品處理時(shí)間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。

　　酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

　　利用免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用，通過化學(xué)方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結(jié)合，形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合，然后加入待測克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結(jié)合，洗滌后加底物，根據(jù)有色物的變化計(jì)量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多，則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450 nm，參比波長應(yīng)大于600 nm。

　　膠體金免疫層析法（Colloidalgold immunochromatography）

　　利用競爭法膠體金免疫層析技術(shù)，檢測液中的Clen與金標(biāo)墊上的金標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值，未結(jié)合的金標(biāo)抗體流到T區(qū)時(shí)，被固定在膜上的Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合，逐漸凝集成一條可見的T線；若Clen濃度高于靈敏度值，金標(biāo)抗體全部形成復(fù)合物，不會再與T線處Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合形成可見T線。未固定的復(fù)合物流過T區(qū)被C區(qū)的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現(xiàn)則表明免疫層析發(fā)生，即試紙有效.

　　檢驗(yàn)方法

　　1. 在進(jìn)行測試前先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。

　　2. 撕開鋁塑袋，取出試紙。

　　3. 依據(jù)型號進(jìn)行操作（尿液不得直接浸濕觀察區(qū)）。

　　3.1 將試紙白色一端浸入尿液中（液面不得超過橫線），保持5秒鐘；

　　3.2 用滴管吸取待檢樣品尿液，逐滴緩慢加入3滴樣品于加樣孔中。

　　4. 將試紙平放1分鐘，等待紅色條帶出現(xiàn)。

　　5. 3～8分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，10分鐘后判讀無效。

　　6. 10分鐘內(nèi)可以檢測出結(jié)果

　　結(jié)果判讀

　　陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶。在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。

　　陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)。

　　無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，提示測試失敗或試紙已失效。

　　注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陰性結(jié)果。

　　注意事項(xiàng)

　　1.檢測卡請?jiān)诒Ｙ|(zhì)期內(nèi)一次性使用。

　　2.檢測時(shí)避免陽光直射和電風(fēng)扇直吹。

　　3.盡量不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。

　　4.尿樣滴管不可混用，以免交叉污染。

　　5.如果尿樣出現(xiàn)沉淀或渾濁物，請離心后再檢測。

　　液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）

　　參見SN/T1924—2007 進(jìn)出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物源性食品肌肉和內(nèi)臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。

　　試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時(shí)加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進(jìn)行酶解后，提取液經(jīng)C18和SCX雙SPE柱凈化，液相色譜—質(zhì)譜進(jìn)行測定，內(nèi)標(biāo)法定量。

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