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畜牧人
標(biāo)題:
原位PCR技術(shù)
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作者:
1260364795
時(shí)間:
2017-8-15 14:50
標(biāo)題:
原位PCR技術(shù)
原位
PCR
綜合了
PCR
和原位雜交的優(yōu)點(diǎn)，是一種在組織切片或細(xì)胞涂片上原位對(duì)特定的
DNA
或
RNA
進(jìn)行擴(kuò)增，再用特異性探針原位雜交檢測(cè)。原位
PCR
標(biāo)本一般需先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞膜和核膜有一定的通透性，
PCR
擴(kuò)增所需的各種成分可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)或核內(nèi)，在原位對(duì)特定的
DNA
或
RNA
進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物由于分子量較大或互相交織，不易透過細(xì)胞膜向外彌散，固保留在原位。這樣就很容易應(yīng)用
ISH
將其檢出，同時(shí)還可對(duì)目的
DNA
序列的組織細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。與其他
PCR
方法不同的是，原位
PCR
不必從組織細(xì)胞中分離模板
DNA
或
RNA
。如冷凍的組織或經(jīng)有機(jī)試劑固定的組織細(xì)胞，用蛋白酶、
DNA
酶處理，進(jìn)行原位逆轉(zhuǎn)錄，再加入
PCR
擴(kuò)增試劑，即可進(jìn)行原位
PCR
反應(yīng)。
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