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斑點叉尾鮰傳染性套腸癥及其防治
套腸癥是近年來發生的一種新型細菌性傳染病，危害對象是斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)，已經連續幾年造成了斑點叉尾鮰大批發病死亡，嚴重地威脅著斑點叉尾鮰養殖的健康發展。目前初步認為該病是由嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)引起的急性致死性傳染病，以發生嚴重的腸炎、腸套疊和脫肛為特征，在短時間內即可引起大量死亡，我們稱此病為“斑點叉尾鮰傳染性套腸癥 (Infectiousintussusceptionofchannelcatfish，IICC)該病的致病病原和病理變化特征在水生動物疾病中是罕見的。
1.流行情況該病最早發現于2004年3月下旬，在四川省成都市郊的龍泉湖網箱養殖的斑點叉尾鮰發生了一種新型暴發性傳染病，該病來勢兇猛，具有發病突然，傳染快，死亡率高等特點，在出現癥狀后的1—2d即發生大規模死亡，死亡率一般在90％以上，有的網箱幾乎達100％死亡率。我們通過病理剖解和觀察發現了一種在魚類非常罕見的特征性病理變化即“腸套疊”，而且這種腸套疊的出現率很高，可達60％～95％，病魚一旦出現腸套疊后即不吃食，并很快死亡。相隔一周左右，四川的三臺縣魯班湖、中江縣繼光水庫、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖以及大邑、崇州、新津、眉山等縣市的網箱和池塘養殖的斑點叉尾鮰相繼發生該病。2005年至2006年，該病又連續發生并繼續蔓延擴散，不但四川許多養殖斑點叉尾鮰的地區紛紛發生該病，重慶、貴州、云南和湖北等省市也出現該病流行，而且病情更加嚴重，發病范圍進一步擴大，有些地區甚至整池、整箱死亡，以至斑點叉尾鮰養殖遭受毀滅性打擊。估計這幾年的直接經濟損失就在5000萬元以上。
該病在自然情況下主要感染斑點叉尾鮰，魚苗、魚種和成魚均可感染，其他鲴科魚類也可感染，但在相同養殖條件下的有鱗魚未見感染(如鯉魚、鯽、草魚、鰱、鳙、鱸和武昌魚等)。發病季節主要在春夏，3—9月是其發病的時期，但以3～5月高發，一般是每年的3月下旬或4月初開始發病，發病水溫多在 16℃以上，并隨水溫的升高病程縮短。發病急，病程短，死亡快，一般發病率在90％以上，病程在2—5d，死亡率90％以上，首次發生的疫區往往為 100％。人工感染試驗的斑點叉尾綱在接種感染后8h即出現癥狀，12h后開始發生死亡，在接種后36h內死亡率達100％。
2.病原該病的病原初步認為是斑點叉尾鲴源的嗜麥芽寡養單胞菌。嗜麥芽寡養單胞菌由Hugh等于1960年發現，該菌屬于非發酵型、專性需氧不形成芽孢的革蘭氏陰性菌，廣泛分布于各種水源、土壤和植物根系等。嗜麥芽寡養單胞菌可使山羊和豬等陸生動物以及一些水生動物感染致病，Ben等 (2002)報道嗜麥芽寡養單胞菌是歐洲和美國金槍魚的一種嚴重的病原菌，可感染致病引起死亡；同時該菌還可感染鱷魚、黃緣閉殼龜、卵型鯧和中華絨毛蟹等水產養殖動物而致病。我們于2004年從四川省成都市龍泉湖、三臺縣魯班湖、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖等地網箱養殖的斑點叉尾鮰病魚的體內(肝、腎)分離到一株生理生化特性相同的G—短桿菌(CCFB0024)，通過人工接種試驗，復制出與自然病例相同的癥狀及病理變化，證實其為該病的病原菌。菌株CCFB0024為革蘭氏陰性桿菌，極生多鞭毛，無莢膜，無芽孢，鞭毛數≥2(圖1，2)。在普通營養瓊脂呈灰白色，圓形，表面光滑，邊緣整齊的半透明菌落；在TSA平板上形成圓形，表面光滑，邊緣整齊，直徑0．8—1．2mm的透明的無色菌落；在兔血平板上出現明顯的p溶血環。為非發酵型，嚴格需氧，生長溫度范圍為15—41℃，最適生長溫度為20—30T，在含鹽量5％以下的培養基上能生長，生長的pH范圍為5．0—9．0，最適pH為6．0—7． 0，對除麥芽糖和甘露糖以外的多種糖類不利用產酸，氧化酶陰性，過氧化氫酶、DNA酶、蛋白酶、脲酶、賴氨酸脫羧酶陽性，MR、VP陰性，H：S陰性，凍化牛奶，液化明膠。根據該菌的形態學特征和生理生化特性初步確定為嗜麥芽寡養單胞菌(S．maltophilia)，再結合16SrDNA序列分析進行準確的鑒定，該菌的16SrDNA序列與16SrDNA的同源性最高，且在系統發育樹上與其他的嗜麥芽寡養單胞菌菌株聚在一簇，其同源性在99．4％— 99．6％之間，從而在分子生物學水平確切鑒定該菌為嗜麥芽寡養單胞菌。
該菌胞外產物具有溶血活性、Vero細胞毒性、腸毒性、蛋白酶活性、脂酶活性、DNA酶活性和動物致死性，其對小白鼠的LDs0為4． 70mg／ks，對斑點叉尾鮰的LDso為3．21mg／kg。該菌胞外產物接種健康斑點叉尾鲴后，也出現體表的褪色斑、腹水、腸炎、腸套疊和肝、脾、腎腫大等病變，這與該活菌感染發病的病變相似，表明嗜麥芽寡養單胞菌胞外產物在其致病機制中有著重要的作用。該菌的外毒素是一種相對分子質量為2076D的多肽，該毒素對多種動物紅細胞具有溶血活性，能使兔回腸結扎產生積液反應，致Vero細胞形態學改變，表明其具有溶血活性、腸毒性和細胞毒性，對Vero 細胞的CDso為0.126ug。該外毒素對斑點叉尾鲴具有明顯的致病性，LDso為1．85ms／kg，接種魚出現與嗜麥芽寡養單胞菌感染的相似癥狀與病變，全身多種組織和器官都具有明顯的損傷，病魚RBC和Hb含量顯著減少，WBC增加，紅細胞脆性增加，血清AST、ALT、LDH、CPK活性顯著升高，血清Cr、BUN含量明顯升高，血糖濃度降低和IgM含量降低。
3.癥狀自然發病初期病魚表現為游動緩慢，靠邊或離群獨游，食欲減退或喪失，并很快發展為各鰭條邊緣發白，鰭條基部、下頜及腹部充血，出血。隨病程的發展病魚腹部膨大，體表出現大小不等色素減退的圓形或橢圓形的褪色斑(圖3)，大的退色斑塊直徑3cm，以后在退色斑的基礎上發生潰瘍。小的潰瘍灶直徑0．3～0．5mm，大的潰瘍灶直徑達3sm，并很快著生水霉；部分魚垂死時出現頭向上，尾向下，垂直懸掛于水體中的特殊姿勢，最后病魚沉入水底死亡，當提拉網箱檢查時才發現箱底沉有大量的死魚。發病率90％左右，死亡率80％以上。人工感染試驗的斑點叉尾鮰在接種感染后8h出現游動無力，呼吸緩慢，并逐步出現頭向上，尾向下懸垂于水體中的特殊姿勢，12h后開始發生死亡，在接種后36h內死亡率達100％。
4.病理變化病魚主要表現為體表(特別是腹部和下頜)充血、出血和褪色斑，肛門紅腫，外突，有的魚甚至出現脫肛現象，后腸段的一部分脫出到肛門外(圖4)。鰓絲腫脹發白，粘附大量粘液。腹部膨大，腹腔內充滿大量清亮或淡黃色或含血的腹水(圖5)，胃腸道粘膜充血、出血，胃腸道內沒有食物，胃底部和幽門部粘膜充血、出血。腸道發生卡他性出血性腸炎，腸壁充血，出血，變薄，腸腔內充滿淡黃色或含血的粘液(圖6)，腸道發生痙攣或異常蠕動，常于后腸出現1—2個腸套疊，套疊的長度為0．5—2．5cia(圖7、8)，發生套疊和脫肛的腸道明顯充血、出血和壞死，部分魚還見前腸回縮進入胃內的現象。肝腫大，顏色變淡發白或呈土黃色，部分魚可見出血斑，質地變脆(圖9)，膽囊擴張，膽汁充盈；脾、腎腫大，淤血，呈紫黑色，部分病魚可見鰾和脂肪充血和出血。
病理學組織上，全身多組織器官水腫，細胞腫脹、變性、壞死和炎癥細胞浸潤，特別是肝、腎、胃腸道和骨骼肌的損傷較為嚴重，為其損傷的靶器官。鰓小片水腫，呼吸上皮與毛細血管分離，上皮細胞腫脹、變性、脫落，充滯于鰓小片間隙內及鰓絲間，同時有多量中性白細胞浸潤(圖10)。心肌纖維顆粒變性，肌間隙增寬，血管擴張充血、出血，巨噬細胞、中性白細胞浸潤。肝水腫，狄氏間隙增寬，肝細胞腫脹，空泡變性，甚至發生溶解壞死(圖11)，胰腺細胞變性、壞死，炎癥細胞浸潤(圖12)。腎臟表現為急性腎小球腎炎，腎小球腫大，腎小囊內有多少不等的紅染的炎性滲出液和炎癥細胞，腎小管和集合管廣泛性地變性、壞死；腎間質水腫，造血組織壞死，擬淋巴組織減少，炎癥細胞浸潤。胃腸道表現為卡他性—出血性—壞死性胃腸炎，胃粘膜上皮變性、壞死，脫落，固有膜裸露，固有膜毛細血管擴張充血，大量中性白細胞、巨噬細胞浸潤。低倍鏡下可見腸道腸管環的套疊現象(圖13)，腸上皮變性、壞死，脫落，脫落的上皮細胞、單核細胞和粘液及大量中性白細胞和紅細胞充斥于腸腔內，病變嚴重的病例可見固有膜、粘膜下層壞死，甚至整個腸壁都發生壞死。脾被膜水腫，中性白細胞和巨噬細胞浸潤；脾髓內大量含鐵血黃素沉積，紅髓淤血，脾竇內充滿大量紅細胞、巨噬細胞和一定量的中性白細胞。腦水腫，腦膜血管擴張，充血，腦基質水腫，疏松多孔，呈海綿狀，神經細胞腫脹，體積增大，胞核淡染，靠邊，有的發生固縮。骨骼肌纖維腫脹變性，橫紋模糊，消失，肌漿發生不均勻溶解，嚴重者肌細胞發生壞死，斷裂，崩解，肌間隙有巨噬細胞和中性白細胞浸潤(圖14)。
超微病理學上，病魚肝腎脾腸等器官的細胞均有較為嚴重的損傷，細胞腫脹，超微結構破壞，特別是線粒體和細胞核的損傷很明顯。線粒體表現為腫脹，嵴斷裂，斷裂或溶解消失，呈空囊狀；細胞核變形、染色質溶解或發生濃縮、裂解邊移，甚至形成類似凋亡小體的結構。
5.診斷對斑點叉尾鮰傳染性套腸癥的確診需從病變組織內分離到嗜麥芽寡養單胞菌，并結合臨診癥狀和病理變化進行綜合診斷。用16SrDNA序列分析鑒定嗜麥芽寡養單胞菌更具有準確性，16SrRNA是核糖體RNA的一種，所含的遺傳信息豐富，在結構上分為保守區 (Conserveddomain)和可變區(Var·iabledomain)，保守區能反映生物物種的親緣關系，可變區則能揭示生物物種的特征核酸序列，被認為是最適于細菌系統發育和分類鑒定的指標。目前，16SrRNA或16SrDNA序列分析已廣泛用于水產動物病原菌的鑒定。研究快速準確的診斷方法有助于早診斷，早治療，用病魚腎的組織或其他臟器組織的涂片進行熒光抗體技術或通過血清學酶聯免疫吸附試驗(ELISA)可進行快速診斷。
6.防治(1)由于該病具有發病突然，傳染快，流行廣，死亡率高，一旦發病后很難控制等特點，因此對該病的防治應根據發病特點及病原的特性有針對性地采取防控措施。加強飼養管理，改善水體環境條件，科學飼喂，尤其是水質、氣候突變的時候要注意防病，盡量減少低溶氧和惡劣的水環境等應激因子的刺激。由于本病在開春后，一般是每年的3月下旬或4月初開始發病，發病水溫多在16℃以上，因此要及早預防，在飼料中添加病原菌敏感的藥物投喂，預防該病的發生。當發生該病時，應盡早診斷，盡早治療。
(2)免疫預防是本病最有效最關鍵的預防措施。因此研制出有效的免疫疫苗將對該病的預防控制起著重要作用。但目前對嗜麥芽寡養單胞菌感染免疫預防的資料還很少，我們對斑點叉尾鲴源嗜麥芽寡養單胞菌進行了初步的疫苗防制，以強毒株制成全菌體的滅活疫苗，采用腹腔注射、浸泡和口服法對健康斑點叉尾鲴進行免疫接種，其中浸泡和口服法分別進行了加強免疫，實驗魚對嗜麥芽寡養單胞菌的血清凝集抗體效價及其對嗜麥芽寡養單胞菌的抵抗力均顯著提高，使用過本疫苗的魚均獲得了較高的保護率。
(3)外用消毒藥。主要采用一些消毒潑灑劑進行水體消毒，殺死水環境中的病原菌，但斑點叉尾鲴為無鱗魚，應選擇刺激性小的藥物，如二氧化氯、二氯海因、溴氯海因等。
(4)內服藥物。本病造成的經濟損失大小與藥物使用的早遲有關，如果懷疑為本病發生時，應盡快做病原菌的分離鑒定和藥敏試驗，根據藥敏試驗結果合理選用抗菌藥物。因為嗜麥芽寡養單胞菌具有多重耐藥性，對多數常用的抗菌藥物都有抗性，且對一些開始敏感的藥物也很快會產生耐藥性，這給該菌感染的治療帶來很大的困難，因此在該菌感染的治療中根據藥敏試驗結果，合理選用抗菌藥物是決定藥物防治該病成敗的關鍵。研究發現該菌對廣譜青霉素和大部分頭孢菌素耐藥性高，對氨曲南耐藥率97％，氨芐西林94％，對頭孢唑林、頭孢克洛、頭孢呋肟、頭孢噻肟、頭孢西丁、頭孢曲松的耐藥率均>90％；對氨基糖苷類藥物阿米卡星和慶大霉素耐藥率約64％，妥布霉素77％，且對其它氨基糖苷類耐藥率也較高，甚至達100％。有研究表明，替卡西林／克拉維酸與復方新諾明的聯合用藥具有良好的體外協同作用，用復方新諾明和替卡西林／克拉維酸聯合應用來治療嗜麥芽寡養單胞菌心內膜炎，取得了滿意的效果。根據我們的藥敏實驗結果，斑點叉尾鲴源嗜麥芽寡養單胞菌對磺胺噁唑、磺胺甲噁唑、阿齊霉素、洛美沙星、氯霉素、強力霉素類等高度敏感；對四環素、多粘菌素、諾氟沙星等中度敏感；對妥布霉素、慶大霉素和丁胺卡那霉素等低度敏感；對青霉素、鏈霉素、麥迪霉素、新霉素、萬古霉素、頭孢克洛、頭孢三嗪、頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢西丁、先鋒霉素V等具有耐藥性。我們通過臨床使用效果證實，復方新諾明、洛美沙星、丁胺卡那、氧氟沙星和強力霉素等都是對病原菌很敏感的藥物，若及時使用，一般在1—2個療程即可控制該病。
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發表于 2009-5-3 16:51:29
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