溶菌酶產(chǎn)品對(duì)某水產(chǎn)養(yǎng)殖廠水樣抑菌效果分析

wangxulai

溶菌酶產(chǎn)品對(duì)某水產(chǎn)養(yǎng)殖廠水樣抑菌效果分析

試驗(yàn)材料
分析水樣：采集于杭州市余杭區(qū)某中華鱉養(yǎng)殖基地，共采集8個(gè)養(yǎng)殖池塘混合后為一個(gè)樣品。
溶菌酶產(chǎn)品：杭州公司生產(chǎn)提供
培養(yǎng)基：LB液體與LB固體培養(yǎng)基 pH 7.0
試驗(yàn)方法
1 配制溶菌酶試驗(yàn)液 精確稱量溶菌酶4mg溶解于1ml pH 6.2的磷酸鹽緩沖液中，得4mg/ml的溶菌酶試驗(yàn)液；
2 將滅菌后的LB液體培養(yǎng)基分裝至4只150ml錐形瓶中，每瓶25ml培養(yǎng)基，分別加入1.25ml，0.625ml，0.3125ml和0ml的4mg/ml的溶菌酶溶液，標(biāo)注A，B，C和D。
3 將采集到的水樣經(jīng)濾紙過濾出去殘留的泥沙和其他固體物質(zhì)，濾液收集于50ml滅菌過的離心管中，按1%的比例分別接種至以上4只錐形瓶中，置37℃，200rpm恒溫?fù)u床中過夜培養(yǎng)16~18h；
4 從搖床中將以上各組培養(yǎng)液取出，各取3ml在紫外可見分光光度計(jì)下測(cè)定OD600。
5 將以上各組培養(yǎng)液取50ul涂布LB固體培養(yǎng)基平板（96mm）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。
試驗(yàn)結(jié)果
1各組吸光度如下：
A（0.2mg/ml）組：OD600=0.000          B（0.1mg/ml）組：OD600=0.002
C（0.05mg/ml）組：OD600=0.002         D（0mg/ml）組：OD600=0.617
2 平板菌落統(tǒng)計(jì)
A（0.2mg/ml）組：0                     B（0.1mg/ml）組：0
C（0.05mg/ml）組：0                    D（0mg/ml）組：不計(jì)其數(shù)
附圖如下：
   

為進(jìn)一步了解合適的使用濃度，采用降低的溶菌酶試驗(yàn)濃度再次進(jìn)行試驗(yàn)研究，濃度分別為A組0.01mg/ml，B組0.05mg/ml，C組0.0025mg/ml，D組0 mg/ml。試驗(yàn)方法同上。
試驗(yàn)結(jié)果
1各組吸光度如下：
A（0.01mg/ml）組：OD600=0.105         B（0.005mg/ml）組：OD600=0.107
C（0.0025mg/ml）組：OD600=0.546       D（0mg/ml）組：OD600=1.775
若以D組（空白對(duì)照組）為參照標(biāo)準(zhǔn)（100%），各試驗(yàn)組菌體殘留比例分別為：A組 5.9%；B組 6.03%；C組 30.76%，D組 100%。因此在0.005mg/ml的使用濃度時(shí)可實(shí)現(xiàn)90%以上的抑菌效果，使用為0.0025mg/ml時(shí)可以實(shí)現(xiàn)70%以上的抑菌效果。由此建議使用劑量約為5ppm。
注：以上試驗(yàn)結(jié)果是在實(shí)驗(yàn)室控制條件下得到的，現(xiàn)實(shí)使用時(shí)條件變化可能會(huì)一定程度的影響試驗(yàn)結(jié)果。