畜禽組織中三聚氰胺的測定

天高云淡哥哥 · 發表于 2009-4-10 11:08:12

畜禽組織中三聚氰胺的測定

Determination of melamine in livestock and poultry tissues

2008-12-26發布 2009-01-01實施

四川省質量技術監督局 發布

前言

1 范圍

2 規范性引用文件

3 方法1：高效液相色譜法

4 方法2：氣相色譜質譜法

附錄A （資料性附錄）三聚氰胺標準圖譜

前言

本標準的附錄A為資料性附錄。

本標準按GB/T.1.1-2000《標準的結構和編寫規則》和GB/T.1.2-2002《標準中規范性技術要素內容的確定方法》要求進行編制。

本標準由四川省畜牧食品局提出并歸口。

本標準由四川省質量技術監督局批準。

本標準由四川省畜產品安全檢測中心負責起草。

本標準起草人：林順全、張靜、李云、高慶軍、廖峰、趙立軍。

畜禽組織中三聚氰胺的測定

1　范圍

本標準規定了測定畜禽組織中三聚氰胺的含量的高效液相色譜法(HPLC)和氣相色譜質譜聯用法(GC-MS)，其中GC-MS法為確證法。

本標準適用于畜禽肌肉及內臟中三聚氰胺的測定。

本標準中HPLC法最低定量限為2.0mg/kg，GC-MS法最低定量限為0.05mg/kg。

2　規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

GB/T6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3　方法1：高效液相色譜法

3.1　原理

試樣經乙醚脫脂后用三氯乙酸溶液提取，提取液離心后經混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色譜儀進行測定。

3.2　試劑與材料

除非另有規定，僅使用分析純試劑和符合GB/T6682的三級水，色譜用水符合GB/T6682一級水的規定。

3.2.1　甲醇：色譜純。

3.2.2　乙腈：色譜純。

3.2.3　氨水：濃度25%～28%。

3.2.4　混合型陽離子交換固相萃取柱：60mg，3mL。

3.2.5　三氯乙酸溶液10g/L：稱取10g三氯乙酸加水至1000mL。

3.2.6　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，用甲醇定容至100mL。

3.2.7　乙酸鉛溶液：取2.2g乙酸鉛用約30mL水溶解后定容至100mL。

3.2.8　濾膜：0.45µm，有機相。

3.2.9　甲醇溶液：200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一級水，混勻。

3.2.10　流動相：稱取2.16g辛烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。取該溶液900mL加入100mL乙腈(3.2.2)。

3.2.11　三聚氰胺標準品(純度>99%)。

3.2.12　三聚氰胺標準溶液

3.2.12.1　標準儲備液：稱取100mg(精確到0.1mg)的三聚氰胺標準品，用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/mL，于4℃冰箱內貯存，有效期3個月。

3.2.12.2　標準中間液：吸取標準儲備液5.00mL，于50mL容量瓶內，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL，該溶液三聚氰胺濃度為100μg/mL，于4℃冰箱內貯存，有效期1個月。

3.2.12.3　標準工作液：用移液管分別移取標準中間液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5個100mL容量瓶內，用甲醇溶液(3.2.9)定容，該溶液三聚氰胺濃度為2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃冰箱內貯存，有效期1周。

3.3　儀器與設備

3.3.1　高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

3.3.2　離心機：10000r/min。

3.3.3　渦旋混合器。

3.3.4　帶蓋塑料離心管：50mL

3.3.5　氮吹儀，可控溫至60℃。

3.3.6　固相萃取裝置。

3.3.7　實驗室用絞碎機。

3.3.8　震蕩搖床。

3.4　試樣制備

豬肉、豬肝：取適量新鮮或冷凍的空白或供試組織，絞碎并使均勻。

試樣放入聚乙烯瓶中-16℃～-20℃條件下保存。

3.5　測定步驟

3.5.1　提取

稱取2g試樣(精確至0.01g)于帶蓋塑料離心管（3.3.4），加入約25mL乙醚，搖床上振蕩20min，棄去乙醚，準確加入18mL三氯乙酸溶液(3.2.5)和2mL乙酸鉛溶液(3.2.7)，搖勻，渦旋提取2min，在10000r/min離心機上離心5min，上清液備用。

3.5.2　凈化

分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，準確移取10mL上清液分次上柱，控制過柱速度在1mL/min以內。再用3mL水和3mL甲醇洗滌混合型陽離子交換固相萃取柱，抽近干后用氨水甲醇溶液(3.2.6)6mL洗脫。洗脫液50℃氮氣吹于，準確加入甲醇溶液(3.2.9)1.0mL，渦旋振蕩30s，過0.45µm濾膜，上機測定。

3.5.3　液相色譜條件

色譜柱：C18柱，柱長150mm，內徑4.6mm，粒度5μm；或性能相當的色譜柱。

柱溫：30℃。

流動相流速：1.0mL/min。

檢測波長：240nm。

3.5.4　測定

按照保留時間進行定性，試樣與標準品保留時間的相對偏差不大于2%，單點或多點校正外標法定量。待測樣液中三聚氰胺的響應值應在工作曲線范圍內。

3.6　結果計算和表述

3.6.1　試樣中三聚氰胺的含量X，以質量分數毫克每千克(mg/kg)表示，單點校正按式(1)計算