如何做藥敏試驗

minlingang

   藥敏試驗根據(jù)美國臨床標準委員會（NCCLS）推薦的K-B瓊脂法進行，藥敏紙片選擇中國生物制品鑒定所藥敏紙片，試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素：氨芐西林（AMP），阿莫西林/克拉維酸（AMC），頭孢噻吩（CFT），頭孢噻肟（CTX），慶大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），環(huán)丙沙星（CIP），四環(huán)素（TBT），利福平（RFA），復(fù)方新諾明（SMZ）。藥敏結(jié)果判定標準按照NCCLs手冊2005版。

1. 操作方法：

（1）將待檢菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)16～18小時，然后挑取普通營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)菌落，懸于3ml生理鹽水中，混勻后與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調(diào)整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。

（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多余菌液。用棉拭子涂布整個M-H培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿周邊繞兩圈，保證涂均勻。

（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在菌接種后15分鐘內(nèi)貼完紙片。

（4）將平板反轉(zhuǎn)，孵育18～24小時后取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數(shù)毫米數(shù)并記錄（附表6）。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。結(jié)果判斷依據(jù)鑒定所藥敏紙片判定標準。

（5）每次藥敏試驗必須用ATCC 25922大腸桿菌做質(zhì)控。只有當質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測試菌株的結(jié)果才可以報告。ATCC 25922的結(jié)果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。

0.5麥氏比濁管配制方法：

0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml

0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml

將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。有效期為6個月。

2. 注意事項：

(1) 制備MH瓊脂平板應(yīng)用直徑90mm平皿，在水平的實驗臺上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養(yǎng)基），瓊脂凝固后塑料包裝放4℃保存，在5 日內(nèi)用完，使用前應(yīng)在37℃培養(yǎng)箱烤干平皿表面水滴。傾注平皿前應(yīng)用pH計測pH值是否正確(pH應(yīng)為7.3)。pH過低會導(dǎo)致氨基糖苷類，大環(huán)內(nèi)酯類失效，而青霉素活力增強。

(2) 藥敏紙片長期儲存應(yīng)于－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應(yīng)至于含干燥劑的密封容器內(nèi)。使用時從低溫取出后,放置平衡到室溫后才可打開，用完后應(yīng)立即將紙片放回冰箱內(nèi)的密封容器內(nèi)。
過期紙片不能使用, 應(yīng)棄去。

(3) 不穩(wěn)定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復(fù)合藥等, 應(yīng)冷凍保存, 最好在-40 ℃以下。

(4) 保證質(zhì)控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復(fù)活。然后每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，傳出細菌供常規(guī)用。待用剩至最后一支，可傳種在M-H平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。

3.質(zhì)量控制

質(zhì)量控制方法 是用與常規(guī)實驗相同的操作方法，測定質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)。應(yīng)使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的涂布方法等均同常規(guī)操作，測定的抗菌素種類也應(yīng)與常規(guī)測定的種類相同。

哨鴿

不錯，學習了，不過藥敏試紙的制作不是很詳細哦

哨鴿 于 2009-8-5 08:55 補充以下內(nèi)容

不錯，學習了，不過藥敏試紙的制作不是很詳細哦

向日葵123

藥敏紙片可以買啊。有很多商品化的

tianxiangdi

哈哈，正好在做此類實驗
藥敏紙片的制作
　　紙片法中使用的藥敏紙片目前市場上已有較多廠家的產(chǎn)品銷售。但也可根據(jù)需要自制，具體自制的方法如下：
　　取質(zhì)量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙扎口或包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓滅菌后，置于37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml計，在上述含有50片紙片的小瓶內(nèi)加入藥液0.5ml，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡30分鐘即可。同時在記錄藥物名稱，于37℃溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置陰暗干燥處或家用冰箱中保存，有效期4-6個月。