有關大腸桿菌工業發酵

mondl

有誰有大腸桿菌工業發酵的資料的

轉基因大腸桿菌，通過基因工程手段，設計一段核苷酸序列移植入大腸桿菌，用于生產所需的目的蛋白 。想了解下有誰做過這方面研究的，能不能分享下。

或者發到我郵箱：mondl@163.com

謝謝了

mondl 于 2009-9-12 09:55 補充以下內容

希望知道的朋友幫下忙，或者開貼出售，不過窮人，不要太貴:haoa:

孤世才子

期待高手回答，，，，，，，，，，

mondl

目的產品用于飼料方面，不是醫藥、食品，相對要求要松點，望達人不吝賜教

葉赫娜蘭.孤城

我們實驗室的課題啊。（微生物技術國家重點實驗室，國家糖工程技術研究中心）在國內差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構建還是發酵過程優化啊？

mondl

發酵過程優化吧

菌種是別人提供的，沒接觸過這個，要寫相關內容不知道如何入手。。。。

提供者是實驗室培養，說實驗室發酵跟工業發酵相差比較大，他對工業發酵也不了解

mondl

引用自葉赫娜蘭-孤城 發表于 2009-9-18 10:58的內容
我們實驗室的課題啊。（微生物技術國家重點實驗室，國家糖工程技術研究中心）在國內差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構建還是發酵過程優化啊？

現在的轉基因菌種是人為移植一段編寫的核苷酸序列段，設計核苷酸序列在菌體中表現為蛋白質（目標小肽不斷重復），在體內蛋白酶酶解為目標小肽.
不知道這個發酵過程怎么控制的好

煩李博士幫幫忙了

葉赫娜蘭.孤城

1,菌株構建好沒有，目前表達量多少？可以進入優化程序了嗎？
2，菌株穩定性如何？使用整合到基因組還是質粒？
3，誘導機制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達更合理些。
5，這個短肽是什么？

望認真回答一下，我看能幫您些什么。

mondl

引用自葉赫娜蘭-孤城 發表于 2009-9-21 08:48的內容
1,菌株構建好沒有，目前表達量多少？可以進入優化程序了嗎？
2，菌株穩定性如何？使用整合到基因組還是質粒？
3，誘導機制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達更合理些。
5，這個短肽是什么？

1. 菌株構建好了的，目前實驗室表達量是12g/L。目的蛋白占總蛋白的40%左右。
2. 實驗室發酵菌株穩定性達到要求，Gn多聚體核苷酸序列是克隆到pET2a質粒上的。
3. 這個不懂。。。。。原文寫下來吧：將pR-12Gn多聚體核苷酸序列克隆到pET32a質粒上，獲得原核表達載體pET-12Gn，轉化大腸桿菌BL21（DE3），經陽性克隆檢測并測序證明序列正確后，在IPTG誘導下進行蛋白表達。
4. 這個我也不是很清楚，是別人實驗室提供的數據。。。。他們貌似選過不少菌種，最后選擇大腸桿菌做母體。（根據大腸桿菌偏愛合成含特異胰蛋白酶和胃蛋白酶酶切點的Gly-Gln二肽核苷酸序列Gn，并克隆至pRSET A質粒中，采用串聯重復策略獲得pR-12Gn重組質粒。）
5. 這個短肽是Gly-Gln二肽，不是直接表達，在菌體獲取聚合蛋白，經酶切后獲取小肽。

葉赫娜蘭.孤城

這個水平（12G）可以轉入發酵了。想做到什么水平呢？

是發文章的水平還是工業水平。如是前者，要有代謝流分析和比較時髦點的算法----也就是先做試驗，自己做出明確目標后，把算法湊上----就行了。
如是后者，則要傳統分析結合代謝流分析，選擇工藝路線等等一步一步往下走。

不管怎樣，要做N批發酵，必須要有比較先進的發酵罐。

mondl

這個按照你的經驗，理論上用什么類型的發酵罐跟按照什么樣的發酵流程比較合理？

主要作用是在于寫文章，但是沒接觸過工業發酵，對這方面一竅不通。。。實驗室發酵跟工業發酵相差也比較大，可比性不高。。。。