和胃平喘對小鼠腸絨毛高度的影響

中藥調(diào)理 · 發(fā)表于 2010-8-18 21:01:10

和胃平喘對小鼠腸絨毛高度的影響

葉篤涵1 陳強(qiáng)2 （通訊作者） 李建生2 劉慶華2 陳炳華2 張照紅2 甘平旭3

（1.寧德市科技開發(fā)中心福建寧德 352100；2.福建農(nóng)林大學(xué) 福建福州 350002；3.福州市畜牧站福建福州 350005）

摘要：選擇大小、體重相近的SD雌性小鼠（18-22g）40只，隨機(jī)分為4組，1.5% “和胃平喘”組、2.5% “和胃平喘”組、3.5% “和胃平喘”組和基礎(chǔ)料組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)5只，分別飼喂15天和30天后取腸道做成切片，測定小鼠腸道的腸絨毛高度。結(jié)果表明：15天試驗(yàn)中，1.5% “和胃平喘”組、2.5% “和胃平喘”組、3.5% “和胃平喘”組與對照組間的平均腸絨毛高度差異顯著（P<0.05）。30天試驗(yàn)中，2.5% “和胃平喘”組十二指腸平均腸絨毛(duodenum villus)高度為0.9835±0.1582mm，3.5% “和胃平喘”組十二指腸平均腸絨毛(duodenum villus)高度為0.8898±0.1635mm，2.5% “和胃平喘”組、3.5% “和胃平喘”組的十二指腸平均腸絨毛高度都與對照組的差異極顯著（P<0.01），1.5% “和胃平喘”組的十二指腸平均腸絨毛高度低于對照組，但差異不顯著（P>0.05）；2.5% “和胃平喘”組和3.5% “和胃平喘”組的空腸(jejunum villus)平均腸絨毛高度與對照組間的差異不顯著（P>0.05）；1.5% “和胃平喘”組和2.5% “和胃平喘”組的回腸平均腸絨毛(ileum villus)高度與對照組間的差異不顯著（P>0.05）。在小鼠基礎(chǔ)料中添加“和胃平喘”能不同程度的提高小鼠腸絨毛高度，且以2.5%和3.5%兩個添加量效果最好。
關(guān)鍵詞：和胃平喘；腸絨毛；切片

Effect of HWPC Granules on Length of Intestinal Villus in Mice
Abstract: 40 SD female mice with almost the same size and weight (18-22gs) were selected and then divided randomly into 4 groups, namely G1, G2, G3 and G4. Thee levels of adding dosages of HWPC granules, 1.5%, 2.5% and 3.5%, were used for G1. G2, and G3 respectively as the tested groups, while the G4 was fed on basic diet as the control. Two repetitions per group and five mice per repetition were performed. After feeding 15th day and 35th day, small intestinal tract of each mouse was taken out for histotomy and the length of intestinal villi were carefully measured. The results showed that in 15 days of experiment, the average length of intestinal villus from tested groups were significantly different than that of control group (P<0.05); in 30 days of experiment, the average length of duodemum villus from adding 2.5% HWPC group was 0.9835±o.1582mm and the average length of duodenum villus from adding 3.5% HWPC group was 0.8898+0.1635mm, both were highly significantly different than that of control group (P<0.01) .The average length of duodenum villus from adding 3.5% HWPC group was lower than that of control group, but not significantly different (P>0.05).The average length of jejunum villus from adding  2.5% HWPC group  snd 3.5% group were not sinificantly differwnt than that of control(P>0.05). Furthermore, the average length of ileum villus from adding 1.5% and 2.5 % group  were  not significantly different(P>0.05) than that of control. In conclusion, supplementing HWPC to the basic diet  could increase the length of intestinal villus in some extent; This may be the basic reason for the improvement of animal’s digestion and health by supplementation of HWPC granules; The optimal adding levels were 2.5% and 3.5%,.
Key words: HWPC; intestinal villus; slice

“和胃平喘”是一種新型的復(fù)方中草藥顆粒飼料添加劑，這種新型的復(fù)方中草藥顆粒（陳皮、神曲、山楂、特效中草藥、糖蜜等）是在中獸醫(yī)經(jīng)典方劑的基礎(chǔ)上，不同的中草藥均采取最佳的加工工藝，然后采用糖蜜噴霧造粒制成的適口性好的中草藥飼料添加劑。配方中的糖蜜既發(fā)揮了載體作用，又發(fā)揮了粘結(jié)劑的作用，而且更重要的是糖蜜不僅極大地改善了產(chǎn)品的適口性，同時還可以活化畜禽腸道有益微生物菌群，改善胃腸道環(huán)境，提高采食量，促進(jìn)畜禽快速生長，減少疾病的發(fā)生。
中草藥資源分布廣泛、易種易收、可就地取材、制作簡便、天然性、營養(yǎng)性、成本低廉、殘留較低、增強(qiáng)免疫功能、抗應(yīng)激、抗微生物等特點(diǎn)[1,2]。中草藥即能進(jìn)行動物疫病的群體防治，又能促進(jìn)個體生長發(fā)育，具有個體及群體防治的藥效和營養(yǎng)雙重功能[3]。中草藥天然產(chǎn)品，含有多種活性成分，無毒副作用或很小，保持了各種物質(zhì)的自然形態(tài)和生物活性，中草藥可以改善飼料適口性、改善飼料營養(yǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)化率，并且可以降低畜禽飼養(yǎng)成本。還具有雙向調(diào)節(jié)作用、激素樣作用，不易產(chǎn)生抗藥性。中草藥對畜禽養(yǎng)殖戶來說是一個優(yōu)良的飼料添加劑。
本試驗(yàn)是驗(yàn)證“和胃平喘”是否有促進(jìn)動物吸收消化的能力，選取小腸腸絨毛高度為指標(biāo)進(jìn)行檢測，為今后對“和胃平喘”在畜牧業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，并進(jìn)一步推廣“和胃平喘”在畜牧業(yè)中的應(yīng)用提供參考。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
SD雌性小鼠（18-22g）、基礎(chǔ)料（福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心）
和胃平喘（湖北金谷藥業(yè)有限公司），批號：鄂飼預(yù)字（2009）178084
Motic電子顯微鏡
Laika切片機(jī)
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 小鼠飼養(yǎng)和管理
選擇大小、體重相近的小鼠（18-22g）40只，隨機(jī)分為4組，即基礎(chǔ)料添加“和胃平喘”1.5%組（1.5%組）；基礎(chǔ)料添加“和胃平喘”2.5%組（2.5%組）；基礎(chǔ)料添加“和胃平喘”3.5%組（3.5%組）；基礎(chǔ)料組（對照組）；每組2個重復(fù)，每個重復(fù)5只。讓小鼠自由采食（不夠時添加足夠的料），分別飼喂15天和30天，做好小鼠日常飼養(yǎng)管理。
1.2.2 組織石蠟切片的制作過程
1.2.2.1 取材、固定
小鼠在殺前禁食24h，處死小鼠，破開腹部，取小數(shù)腸道組織。在0.9%生理鹽水中清洗。挑取腸組織在10%甲醛中固定24h以上。取材在動物處死后立即進(jìn)行解剖和切取組織材料。
1.2.2.2 脫水
將組織從10%甲醛中取出流水沖洗24h。以吸取腸組織中的固定液。
1.2.2.3 透明
將流水沖洗好的組織依次放入：50%乙醇45min×2次→70%乙醇×2次→80%乙醇×2次→95%乙醇30min→100%乙醇(Ⅱ)45min→100%乙醇(Ⅱ)45min→乙醇:二甲苯(1:1)30 min→二甲苯(Ⅰ) 20min→二甲苯(Ⅱ)20min。
1.2.2.4 包埋
組織浸蠟，在石蠟Ⅰ（熔點(diǎn)50-52℃）、石蠟Ⅱ（52-54℃）、石蠟Ⅲ（54-56℃）各浸蠟45min，恒溫箱溫度控制在58-60℃。浸蠟完成后，用石蠟（56-58℃）+少許蜂蠟進(jìn)行組織包埋。包埋好的蠟快修理成梯形焊于小木塊或小紙框上。4℃保存，備用。
1.2.2.5 修塊、切片
切去組織周圍過多的石蠟，一般情況下在組織周圍留有約1-2mm的石蠟邊，兩邊必須平行。調(diào)整切片機(jī)上的切片厚度為5um，然后切片。
44℃水浴展平，編號。展好的切片在室溫下稍微干燥后，放在37℃恒溫烤箱中烘干24h。
1.2.2.6 脫蠟、染色
將烘干的切片梯度脫蠟：二甲苯(Ⅰ)20min→二甲苯(Ⅱ)20min→100%乙醇(Ⅰ)5min→100%乙醇（Ⅱ）5min→95%乙醇5min→80%乙醇5min→70%乙醇5min→50%乙醇5min→自來水2min→蘇木精染色10min→1％鹽酸酒精3s→流水沖洗反藍(lán)2-3h→伊紅染色3s→自來水沖洗lmin，染色完成，烘箱37℃烘干24h。
1.2.2.7 封片
切片好的組織放入二甲苯中透明，用中性樹膠封片。
1.2.2.8 觀察切片
將封好的切片在顯微鏡下觀察（已預(yù)先裝好目鏡測微尺或有標(biāo)尺的電子顯微鏡）下觀察整個完整的腸絨毛，測量其高度（長度），做好記錄。
1.2.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
所測得的腸絨毛高度數(shù)值采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，LSD多重比較。
2 結(jié)果與分析
2.1 小鼠飼養(yǎng)15天，小鼠小腸腸絨毛高度如表1。切片圖1-圖4。
表1 和胃平喘對小鼠小腸腸絨毛高度的影響（15天）
Tabel1. Effect of HWPC on length of intestinal villus in rats (15 days)
組別                            高度（mm）
對照組                   0.7808±0.1094aA
1.5%和胃平喘組       0.8807±0.0754aA
2.5%和胃平喘組       0.8557±0.0937bA
3.5%和胃平喘組       0.8898±0.1635bA
注：相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母、相同大寫字母表示差異顯著（P<0.05），不同小寫字母、不同大寫字母表示差異極顯著（P<0.01）,下同。
15天各試驗(yàn)組與對照組間的腸絨毛高度差異顯著（P<0.05）。說明各添加量（1.5%、2.5%、3.5%）的和胃平喘都能顯著提高小鼠腸絨毛高度。其中，添加3.5%和胃平喘組的腸絨毛高度比對照組的大0.109mm，效果最好；添加1.5%和胃平喘組的腸絨毛高度比對照組的大0.0999mm；添加2.5%和胃平喘組的腸絨毛高度比對照組的大0.0749mm。

圖1. 對照組腸絨毛切片（15天）
Fig1. Iintestinal villus’s slice of control group (15 days)

圖2. 和胃平喘1.5%組腸絨毛切片（15天）
Fig2. Iintestinal villus’s slice of adding 1.5% HWPC (15 days)

圖3. 和胃平喘2.5%組腸絨毛切片（15天）
Fig3. Iintestinal villus’s slice of adding 2.5% HWPC (15 days)

圖4. 和胃平喘3.5%組腸絨毛切片（15天）
Fig4. Iintestinal villus’s slice of adding 3.5% HWPC (15 days)

2.2 小鼠飼喂30天，小鼠十二指腸腸絨毛高度如表2，切片圖5-圖8。
表2 和胃平喘對小鼠十二指腸腸絨毛高度的影響（30天）
Tabel2. Effect of HWPC on length of duodenum villus in rats (30 days)
組別       高度（mm）
對照組       0.7815±0.2454aA
1.5%和胃平喘組       0.7180±0.0552aA
2.5%和胃平喘組       0.9835±0.1582bB
3.5%和胃平喘組       0.8978±0.1447bB
2.5%和胃平喘組十二指腸和3.5%組十二指腸組的平均腸絨毛高度都極顯著高于對照組十二指腸腸絨毛高度（P<0.01），說明在小鼠飼料中添加2.5%和3.5%的和胃平喘都能極顯著的提高小鼠飼喂30天后的十二指腸腸絨毛高度。其中，2.5%十二指腸組的平均腸絨毛高度比對照組的大0.202mm；3.5%十二指腸組的平均腸絨毛高度比對照組的大0.1163mm；說明在小鼠飼料中添加2.5%和胃平喘更有利于提高小鼠十二指腸的腸絨毛高度，效果更好。
1.5%組十二指腸的平均腸絨毛高度比對照組的低低0.0635mm，但差異不顯著（P>0.05），說明在小鼠飼料中添加1.5%和胃平喘會降低小鼠飼喂30天后的十二指腸腸絨毛高度，不利于提高小鼠腸絨毛高度。

圖5 對照組十二指腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig5. duodenum villus’s slice of control group (30 days)

圖6 和胃平喘1.5%組十二指腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig6. duodenum villus’slice of adding 1.5% HWPC (30 days)

圖7 和胃平喘2.5%組十二指腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig7. duodenum villus’slice of adding 2.5% HWPC (30 days)

圖8 和胃平喘3.5%組十二指腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig8. duodenum villus’slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
2.3 小鼠飼喂30天，小鼠空腸腸絨毛高度如表3，切片圖9-圖12。
表3 和胃平喘對小鼠空腸腸絨毛高度的影響(30天)
Tabel3. Effect of HWPC on length of jejunum villus in rats (30 days)
組別       高度（mm）
對照組       0.7492±0.1230aA
1.5%和胃平喘組       0.7523±0.2635 aA
2.5%和胃平喘組       0.7733±0.0877aA
3.5%和胃平喘組       0.7262±0.1187aA
各空腸試驗(yàn)組與對照組間的平均腸絨毛高度差異不顯著（P>0.05），1.5%和胃平喘組空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的大0.0031mm，2.5%和胃平喘組空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的大0.0241mm，3.5%和胃平喘組空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的低0.023mm。

圖9 對照組空腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig9. jejunum villus’s slice of control group (30 days)

圖10 和胃平喘1.5%組空腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig10. jejunum villus’s slice of adding 1.5% HWPC (30 days)

圖11 和胃平喘2.5%組空腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig11. jejunum villus’s slice of adding 2.5% HWPC (30 days)

圖12 和胃平喘3.5%組空腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig12. jejunum villus’s slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
2.4 小鼠飼喂30天，小鼠回腸腸絨毛高度如表4，切片圖13-圖16。

表4 和胃平喘對小鼠回腸腸絨毛高度的影響（30天）
Tabel4. Effect of HWPC on length of ileum villus in rats (30 days)
組別                            高度（mm）
對照組                   0.5125±0.0206aA
1.5%和胃平喘組       0.5786±0.0643aA
2.5%和胃平喘組       0.5175±0.0582aA
3.5%和胃平喘組       0.5312±0.0561aA
各回腸試驗(yàn)組與對照組間的平均腸絨毛高度差異不顯著（P>0.05），1.5%和胃平喘組的空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的大0.0661mm，2.5%和胃平喘空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的大0.005mm，3.5%和胃平喘空腸腸絨毛高度比對照組腸絨毛的大0.0187mm。

圖13 對照組回腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig13. ileum villus’s slice of control group (30 days)

圖14 和胃平喘1.5%組回腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig14. ileum villus’s slice of adding 1.5% HWPC (30 days)

圖15 和胃平喘2.5%組回腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig15. ileum villus’s slice of adding 2.5% HWPC (30 days)

圖16 和胃平喘3.5%組回腸腸絨毛切片圖（30天）
Fig16. ileum villus’s slice of adding 3.5% HWPC (30 days)
3 討論
腸絨毛(intestinal villus)是由腸上皮和固有層共同向腸腔突出形成的細(xì)小突起，長約0.35～1mm，可使腸腔表面積擴(kuò)大約10倍，絨毛多呈柱狀、葉狀或指狀等[4]。小腸是動物及人體內(nèi)具有消化和吸收等功能的重要器官，而小腸絨毛則是對各種營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行吸收的重要結(jié)構(gòu)。小腸的正常結(jié)構(gòu)是營養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收的基礎(chǔ)。小腸絨毛微血管密集，走行復(fù)雜[5]。
腸絨毛在十二指腸及空腸分布最密，正常小腸絨毛排列整齊緊密、細(xì)長、呈柱狀。腸絨毛的完整性及高度，決定了小腸的吸收面積，影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及動物的生長[6]。
本試驗(yàn)中，小鼠飼喂30d，2.5%和胃平喘組和3.5%和胃平喘組的十二指腸腸絨毛高度都極顯著高于對照組，這可能是由于和胃平喘中含有的復(fù)合中草藥活性成分起作用。而2.5%和胃平喘組的促進(jìn)小鼠十二指腸腸絨毛生長高度比3.5%和胃平喘組的大0.0857mm，可能由于3.5%和胃平喘組中含有的活性成分多于2.5%和胃平喘組，超過最適宜的添加量，量過多起抑制作用，2.5%和胃平喘的添加量更能適合小鼠十二指腸腸絨毛變長；1.5%和胃平喘組的十二指腸腸絨毛高度低于對照組，可能是由于1.5%的添加量中含有的活性成分太少，不足以促進(jìn)小鼠十二指腸腸絨毛生長，反而起抑制作用。
對于空腸和回腸，添加不同比例的和胃平喘均未見有顯著的促進(jìn)小鼠空腸和回腸的腸絨毛高度變長，這可能是由于十二指腸是小腸中的重要腸斷，很多營養(yǎng)物質(zhì)在十二指腸里被吸收，少量在空腸和回腸段吸收。
關(guān)于不同種添加劑對腸絨毛高度的應(yīng)用報道也有不少，張運(yùn)濤等[7]報道，在蛋用仔雞日糧中添加酵母多糖，可以明顯保護(hù)雛雞小腸絨毛。周瓊等[8]報道，美洲大蠊粉可使發(fā)生病理變化的小鼠腸黏膜及絨毛修復(fù)完好，并提高肉雞的腸絨毛高度[9]。張玲等[10]報道，鯽魚中添加木聚糖酶能提高鯽魚的腸絨毛高度，以0.05%的添加量最好。
在指狀絨毛中，絨毛的長度與其腸上皮細(xì)胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)。絨毛變短時，腸上皮細(xì)胞數(shù)減少，對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力降低。正常情況下，隱窩基部的細(xì)胞不斷地分化并向絨毛的端部遷移，形成具有吸收能力的腸上皮細(xì)胞，以補(bǔ)充絨毛正常脫落的腸上皮。腸絨毛長度增加，消化吸收功能增強(qiáng)，腹瀉率降低，生長發(fā)育加快[11]。本試驗(yàn)中得出2.5%和3.5%添加量的和胃平喘都能很明顯的提高小鼠十二指腸腸絨毛高度，關(guān)于其作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。
4 結(jié)論
“和胃平喘”能不同程度的提高小鼠小腸腸絨毛高度。在小鼠飼喂15天試驗(yàn)中，1.5%、2.5%、3.5%這3個添加量的和胃平喘都能顯著提高小鼠的小腸腸絨毛高度；30天試驗(yàn)中，2.5%、3.5%這2個添加量的和胃平喘都能極顯著地提高小鼠的十二指腸腸絨毛高度。

參考文獻(xiàn)
[1] 農(nóng)業(yè)部新編漁藥手冊編撰委員會.新編漁藥手冊[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2005:317-318.
[2] 梁用本.中草藥在防治魚病中的應(yīng)用[J].漁業(yè)致富指南,2004(18):53-53.
[3] 寧宕.5類獸藥開發(fā)前景看好[J].養(yǎng)殖與飼料,2004(2):26.
[4] 成令忠.組織學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:102-125.
[5] 陳延民,李健,張健,等.成年大鼠小腸絨毛微血管構(gòu)筑的掃描電鏡觀察[J].解剖科學(xué)進(jìn)展,2000,6(4):352.
[6] 戴賢君.那西肽對寶石鱸生長性能及小腸絨毛的影響[J].中國動物保健,2006(6):42-43.
[7] 張運(yùn)濤,谷文英,王永玲.酵母多糖對蛋用仔雞小腸絨毛保護(hù)作用的研究[J].糧食與飼料工業(yè),2000(3):30-31.
[8] 周瓊,吳珍泉,李忠榮,等.美洲大蠊粉對腹瀉小鼠腸道修復(fù)的影響[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報,2008,23(2):125-131.
[9] 劉昊,李忠榮,劉景,等.美洲大蠊對肉雞生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)及小腸絨毛高度的影響[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2009,24(1):28-32.
[10] 張玲,聶國興,周洪琪.木聚糖酶對鯽魚生長性能和小腸絨毛的影響[J].浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,25(2):133-138.
[11] 王子旭.鋅硒互作對肉雞腸黏膜結(jié)構(gòu)及黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞影響的研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.