飼料淀粉糊化度測定

007畜牧

　

　試劑：
　　1. 聯(lián)甲苯胺（o-Toluidine）試劑：溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸，家60ml甲苯胺，存于有色玻璃瓶中。
　　2. 乙酸鈉緩沖液：溶解4.1g無水乙酸鈉與1L蒸餾水，用乙酸調(diào)pH至4.5。
　　3. 葡萄糖淀粉酶溶液：將2g根霉葡萄糖淀粉酶（目錄號No.A-7255,Sigma Chemical Co.供貨）分散于250ml乙酸緩沖液，用玻璃棉濾紙（Whaatman No.GF/A）迅速過濾，限2小時內(nèi)使用。葡萄糖淀粉的特異活性是在pH4.5，溫度40℃下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。
　　操作規(guī)程：
　　1. 制備淀粉部分糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的5ml蒸餾水中。
　　2. 制備淀粉完全糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的3ml蒸餾水和1ml 1N NaOH中。5分鐘后加1ml 1N HCl。
　　3. 葡萄糖淀粉酶水解和測定葡萄糖。每個離心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液，40℃保溫30min。加2ml 25%的三氯乙酸鈍化葡萄糖淀粉酶（并使該酶和其他蛋白沉淀），以16,000×g離心5min。
　　4. 取0.5ml上清液于試管中，加入4.5ml聯(lián)甲苯胺（o-Toluidine）試劑，將試管置沸水中10min，用冷水冷卻，加5ml冰醋酸，測定在63.nm的吸收率。
　　按下式計算淀粉糊化度：
　　Y=100*（B-K）/ (A-K)
　　K=A*(C-B) / (A-2B+C)
　　其中，A=全糊化淀粉的吸收率；
　　B= 全糊化淀粉和經(jīng)過30min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率；
　　C= 部分糊化淀粉和經(jīng)過60 min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率；
　　K= 1%完整淀粉經(jīng)過30min水解后的吸收率。這對每種淀粉或特定處理的淀粉是一個常數(shù)，常規(guī)分析中只需測=定一次。
　　這規(guī)程也可用來計算總淀粉%；用葡萄糖溶液（720ug/ml）制定標準曲線。按前法第
　　2步和第3步驟處理樣品，根據(jù)標準曲線讀取葡萄糖濃度。按下式計算淀粉含量：
　　淀粉總量%=葡萄糖*0.9*100/樣品重（干基）


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