蒙脫石對霉菌毒素的體外吸附效果評估

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　　由于當前全球氣候異常，加重了飼料原料的霉菌污染。霉菌在其生長繁殖過程中會產生二次代謝產物——霉菌毒素，目前已知的300余種霉菌毒素中，僅有20 余種對動物生產產生危害，尤以黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、T-2 毒素和嘔吐毒素等為代表。其實，霉菌本身對動物生產不會產生顯著影響，但上述以黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮為代表的20余種霉菌毒素卻會導致動物生產性能降低、臨床疾病，乃至死亡等嚴重后果。

　　在生產實踐中，霉菌無法完全去除。使用防霉劑雖可有效防止飼料霉變，但不能降低已存在于飼料中的霉菌毒素含量，且膨化制粒等處理工藝并不能達到降解霉菌毒素的目的。從技術角度考慮，目前不可能存在真正意義上的霉菌毒素降解劑/裂解劑。鑒于此，飼料中添加霉菌毒素吸附劑是降低霉菌毒素危害、提高動物生產性能的有效手段。

　　雖然霉菌毒素對畜牧生產危害甚大，但國內有關體外快速霉菌毒素吸附劑的相關研究報道較少，而且主要局限于黃曲霉毒素B1。本試驗在模擬體內胃腸道環境下，系統研究了以高純蒙脫石作為霉菌毒素吸附劑對黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZON）、嘔吐毒素（DON）、赭曲霉毒素（OTA）和煙曲霉毒素B1（FUMB1） 的吸附情況，為業內霉菌毒素吸附劑的實際選擇與應用提供依據。

　　1  材料

　　1.1 霉菌毒素吸附劑

　　由內蒙古愛牧化工有限公司提供兩種納米蒙脫石，分別標記為樣品A和樣品B。

　　1.2霉菌毒素標準品

　　AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1，由新加坡羅馬實驗室（Romer Labs）提供。

　　1.2.1緩沖溶液配制

　　（1）檸檬酸緩沖液：80.3%的0.1M檸檬酸溶液于19.7%的0.2M磷酸氫二鈉溶液混合，調節至pH=3.0。

　　（2）磷酸氫鈉緩沖液:65.3%的1/15M磷酸二氫鉀溶液于34.7%的1/15M磷酸氫二鈉溶液混合，調節至pH=6.5。

　　1.2.2標準霉菌毒素反應液

　　在pH3.0檸檬酸緩沖液和pH6.5磷酸氫鈉緩沖液配制霉菌毒素反應液，反應液中霉菌毒素含量如表1所示。

　　表1  反應液中霉菌毒素含量

　　1.3主要儀器及試劑

　　島津LC-20AB(Shimadzu LC-20AB，日本島津公司)，配熒光檢測器、自動進樣器、恒溫柱溫箱、振蕩器、離心機；所用化學試劑均為色譜純，水為去離子水。

　　2 方法

　　參照新加坡羅馬實驗（Romer Labs）提供方法進行。

　　2.1 吸附試驗原理

　　試管中稱取一定量的蒙脫石樣品，加入（按0.1%（w/v）比例）預先已配制的反應液（含有所要求的標準霉菌毒素濃度），37℃下震蕩培養1.5h后離心。取離心后的上層清液，用高效液相色譜儀測定其中所含不同霉菌毒素的濃度，從而計算出蒙脫石產品作為霉菌毒素吸附劑的吸附率。

　　2.2 吸附實驗步驟

　　（1）分別在兩種蒙脫石樣品中加入10ml霉菌毒素標準緩沖液，并預留2支試管用于霉菌毒素標準緩沖液空白組（不含吸附劑）；

　　（2）將試管在37℃水浴恒溫振蕩器中震蕩1.5h，震蕩過程中確定試管被固定；用離心機在2000rpm/min下離心10min后，小心稱取上清液200μL（避免下層混濁物帶入上述液體），然后加入5ml流動相，混合均勻后裝入進樣瓶，取樣100μL，通過高壓液相色譜法（HPLC）進行分析。

　　每種蒙脫石的用量為0.1%。每種蒙脫石的溶液配制時做重復處理，并同時在2個pH水平上也進行3個重復處理。

　　3 結論和結果

　　如表2所示，pH3.0條件下，2種蒙脫石吸附劑對AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1均有不同程度的吸附作用。除了AFB1外，樣品A的吸附能力均略大于樣品B。

　　表2  pH3.0條件下2種蒙脫石樣品對不同霉菌毒素的吸附效果

　　如表3所示，同PH3.0條件下情況相似，pH6.5條件下，2種蒙脫石吸附劑對AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1也均有不同程度的吸附作用。并且吸附效果也不盡相同，樣品A略優于樣品B。

　　表3 PH6.5條件下2種蒙脫石樣品對不同霉菌毒素的吸附效果

　　4、小結

　　（1）本實驗條件下，根據以上數據可以看出，無論pH3.0檸檬酸緩沖液條件下，還是pH6.5磷酸緩沖液條件下，兩種蒙脫石吸附劑對所測幾種霉菌毒素均有不同程度的吸附作用。在兩種條件下，樣品A的吸附能力均略優于樣品B，但差異并不顯著。

　　（2）蒙脫石作為霉菌毒素吸附劑材料，對于具有剛性共面苯環結構霉菌毒素吸附能力優于部分共面結構和沒有共面的杯狀結構霉菌毒素。