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完成單位：中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 藥品 巴爾吡爾和進口原液兩種藥液，均為水溶液，由北京娜爾生物技術有限公司提供。
1.1.2 菌種 馬腺疫鏈球菌C55100、金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2和魏氏梭菌均購自中國獸藥監察所。無乳鏈球菌06413、大腸桿菌3#和停乳鏈球菌29系從蘭州、江蘇和大理采集的患臨床型乳房炎的病乳中分離、鑒定并凍干保存的菌種。
1.1.3 培養基 普通牛肉湯、7%羊血瓊脂斜面、水解酪蛋白瓊脂培養基 (MH)。
1.1.4 不銹鋼管 外徑8mm，內徑6mm，高10mm。
1.2 方法
1.2.1 杯碟法抑菌試驗 將凍干菌種開啟后，分別接種到普通牛肉湯中，37℃溫箱中培養20h，經涂片鏡鑒純粹后，分別接種于血瓊脂斜面，37℃溫箱中培養20h后取出，置4℃冰箱中保存。試驗時將血斜面菌種分別接種于普通牛肉湯中，37℃溫箱中培養20h，經涂片鏡鑒純粹后，將不同菌株的菌液進行不同倍數的稀釋（由與試驗確定）。將稀釋好的菌液用滅菌吸管吸取0.1ml，加到MH 平板上，并立即用涂抹棒將菌液均勻涂抹于整個瓊脂表面。平皿室溫放置5-10min，待菌液吸干后，將小鋼杯在酒精燈上微微燒灼，等距離立置在瓊脂表面上數個，然后將不同稀釋濃度的藥液分別加入鋼杯中，爾后平皿蓋換成陶瓦蓋，平置于37℃溫箱中培養24h，取出后用游標卡尺測量抑菌圈直徑。每株菌重復上述試驗2-3次，取平均值，即為該藥對此菌株的抑菌結果。
1.2.2 試管抑菌試驗 將巴爾吡爾藥液用肉湯進行稀釋，將藥液分別稀釋成1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640共8個稀釋度，每個稀釋度分別裝于8只試管（12mm×100mm）內，每管2mL，再分別加入培養20h各菌株1000倍肉湯稀釋液0.05mL。另設一管藥物對照（不加菌液）和各菌株的細菌對照（2mL肉湯加0.05mL菌液），置于37℃溫箱培養24h后，判定抑菌效果。
1.2.3 殺菌試驗 按農業部獸用消毒劑技術規范，采用試管內2倍稀釋法進行。試驗前將24h肉湯培養物離心，棄去上清液，沉淀用0.03M磷酸鹽緩沖液制成一定濃度的細菌混懸液，并與標準比濁管比較，將菌液調整到試驗所需的活菌數。將巴爾吡爾藥液用滅菌蒸餾水進行對倍稀釋,每管2.5ml,然后加等量細菌懸液,混勻并計時,作用10min、20min和30min后，取0.5ml加入1.5ml中和劑（磷酸鹽緩沖液）、中和10min后，取0.5ml加到4.5ml營養肉湯中，37℃培養7d。以無菌生長的最大稀釋倍數作為本品的最小殺菌濃度（MIC），其作用時間為最短有效作用時間。并設營養肉湯及磷酸鹽緩沖液（代替消毒劑）為對照。
2 結果
表1 巴爾吡爾和進口原液杯碟法抑菌試驗結果 單位：直徑mm
表2 巴爾吡爾殺菌試驗結果
注：+為細菌生長，-為細菌不生長
表3 巴爾吡爾和進口原液試管法抑菌試驗結果
注：+為細菌生長，-為細菌不生長
3 結論
巴爾吡爾和進口原液不稀釋對畜禽常見病原菌均有較好的抑菌效果，但做1：5和1：10稀釋后無抑菌效果或抑菌效果很差。試管對倍稀釋法抑菌試驗結果表明，巴爾吡爾對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、停乳鏈球菌和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1：10，對馬腺疫鏈球菌和無乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：20。進口原液對金黃色葡萄球菌和停乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：40；對大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1：80；對馬腺疫鏈球菌和無乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：320。
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狗仔卡
發表于 2014-1-13 15:23:27
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