關(guān)于產(chǎn)膠原蛋白酶菌株的篩選

kiroco

在實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)了很多的問題，比如在初篩平板上可以看到明膠酶產(chǎn)生菌周圍有隱約的霧狀圈，而且在冰箱中放置一段時(shí)間后更加明顯，通過后面實(shí)驗(yàn)也知道了這樣選出的菌大都是能分解明膠的，而且此時(shí)的圈的邊緣與滴加了酸性汞后產(chǎn)生的透明圈的邊緣是一致的，這大大的提高了對目的菌株的篩選效率和準(zhǔn)確度；在遇到前后兩次實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)相距很遠(yuǎn)時(shí)（如菌落水解圈與菌落大小的比值），采用多次測量后拋棄相距太遠(yuǎn)的值，再求平均的方式；在測定酶的活力的開始階段是一個(gè)漫漫摸索的過程，往往是顯色后顏色太深，儀器不能測定或是數(shù)據(jù)大大的超過了標(biāo)準(zhǔn)曲線的有效范圍，需要對酶液和膠原逐個(gè)濃度的稀釋，在多次的測量后確定為實(shí)驗(yàn)中的數(shù)據(jù)；等等。


對COL-J菌重復(fù)做了牛皮消化實(shí)驗(yàn)和酶活性測定實(shí)驗(yàn)，得到與前面實(shí)驗(yàn)相近的結(jié)果，表明此菌的膠原蛋白酶活力穩(wěn)定。而且本實(shí)驗(yàn)所測的酶活是在常規(guī)條件下測定的，在后續(xù)的菌的培養(yǎng)條件的優(yōu)化后，相信酶活力還會有很大的提高，具有更高的應(yīng)用價(jià)值。


應(yīng)當(dāng)注意的是，透明圈直徑與菌落直徑之比的大小不能完全代表酶活大小, 僅以此作為彈性蛋白酶酶活力大小的定量指標(biāo)是不太可靠的[10]，只能作為大體的依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果與之一致，如COL-J的比例為3.71，不是最大的，但卻是牛皮消化效果最好的。透明圈法對于大多數(shù)的菌株還是有用的，對本實(shí)驗(yàn)有很好的指導(dǎo)意義。